Laura Orsini nacque a Roma nel 1492 ed era probabilmente figlia di papa Alessandro VI e dell'amante pontificale Giulia Farnese, sorella del cardinale Alessandro Farnese (poi Papa Paolo III).
Il 2 aprile 1499 a Palazzo Farnese fu promessa in sposa a Federico Farnese, figlio di Raimondo Farnese e nipote di Pier Paolo Farnese. La promessa fu successivamente annullata, e il 16 novembre 1505 sposò Nicola Franciotti Della Rovere, con una dote di 30.000 ducati. Il marito era nipote di Papa Giulio II, che volle il matrimonio "per preparare la riconciliazione con gli Orsini". Ebbero due figli: Giulio e Lavinia.
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